技術(shù)文章
體內(nèi)哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗儀
體內(nèi)哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗儀
儀器介紹
實驗?zāi)康模?/strong>
檢測受試物是否引起哺乳動物骨髓細胞染色體畸變,以評價受試物致突變的可能性
實驗概述：
染色體是細胞核中具有特殊結(jié)構(gòu)和遺傳功能的小體,當(dāng)化學(xué)物質(zhì)作用于細胞周期G1期和S期時誘發(fā)染色體型畸變,而作用于G2期時則誘發(fā)染色單體型畸變。給試驗的大、小鼠腹腔注入秋水仙素抑制細胞分裂時紡錘絲的形成,以增加中期分裂相細胞的比例,并使染色體絲縮短、分散、輪廓清晰。在顯微鏡下觀察染色體數(shù)目和形態(tài)。本方法特別適用于需考慮體內(nèi)代謝活化后的染色體畸變分析。若有證據(jù)表明受試物或其代謝產(chǎn)物不能到達骨髓,則不適用于本方法，
應(yīng)用范圍
應(yīng)用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域
符合標準：
GB/T 15670.16-2017《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗方法第16部分:體內(nèi)哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗》
二、試驗流程
1）動物選擇:常用嚙齒類動物(大鼠或小鼠)，通常每組至少5只/性別。
2）給藥方案:
單次給藥:通常在采樣前12-48小時給藥(覆蓋細胞周期)
多次給藥:若受試物代謝或毒性需重復(fù)暴露。
3.陽性對照:已知致畸變劑
4.陰性對照:溶劑對照(如生理鹽水或DMSO)
5.采樣時間:通常在給藥后24小時和48小時采集骨髓細胞(覆蓋不同細胞周期階段)
6.染色體制備:
處死動物后取出骨髓細胞。
用秋水仙素(Colchicine)處理，阻斷細胞分裂于中期。低滲處理、固定、制片并染色(如Giemsa染色)
7.鏡檢分析:
觀察至少200個中期分裂相/動物，記錄畸變類型和頻率，
區(qū)分染色體型畸變(如雙著絲粒體)和染色單體型畸變(如斷裂)
三、結(jié)果判定
1）劑量相關(guān)性:畸變率隨劑量增加而升高。
2）統(tǒng)計學(xué)差異:試驗組畸變率顯著高于陰性對照組(如p<0.05)
3）生物學(xué)意義:需結(jié)合歷史對照數(shù)據(jù)和畸變類型綜合評估。
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